REVISTA DE ODONTOLOGÍA
Evaluación de las modificaciones
epiteliales,
la presencia de mastocitos y glucógeno intraepitelial
de la mucosa labial en un modelo
de carcinogénesis química
1 Bernal Baláez, A.E,
2 Suárez C., Pardo s., Adila., León E.
1 Estomatólogo, Universidad de la Habana Cuba. Magíster en
Histología. Ph.D.
Patología Bucal. Profesor Asociado Facultad de Odontología Universidad Nacional
Colombia.
2 Odontólogos graduados de la Facultad de Odontología Universidad Nacional de
Colombia.
Resumen
Este estudio fue llevado a cabo con el propósito de estudiar las modificaciones epiteliales en un proceso de carcinogénesis, además, la variación en la presencia de mastocitos y glucógeno, producidos por la aplicación de benzopireno sobre la mucosa labial de ratones machos IBF1 (IOR/Hab x C57/BL). Se seleccionaron ratones de 4 a 6 semanas de edad y se les suministró comida y agua ad libitum y se dividieron en tres grupos. El primer grupo fue tratado con Benzo(a)pireno, el segundo con Acetona y el tercero permaneció como control. Se aplicaron 10 ìl de estas sustancias sobre la mucosa labial de los animales durante 44 semanas, tres veces por la semana.
Todos los animales fueron sacrificados y se realizó disección del labio. Las muestras fueron fijadas en formalina neutra al 10%, posteriormente, se procesaron por la técnica clásica de inclusión en parafina y se utilizaron tres coloraciones: H&E, PAS y Azul de Tolouidina. Estas biopsias fueron examinadas a las semanas 8, 16, 32 y 44, siguiendo los parámetros propuestos por la OMS (Smith, C. & J.J. Pindborg) (1).
El grupo tratado con Benzo(a)pireno presentó cáncer en la semana 44. Los cambios histológicos más sobresalientes en los diferentes estadios fueron la queratinización superficial, grosor epitelial y displasia previa a estadios neoplásicos. El glucógeno disminuyó hacia la semana 44. Se presentaron cambios en la presencia de mastocitos en el proceso de carcinogénesis química, aunque su papel no se comprende aún.
Palabras clave: Mastocitos, glucógeno, azul de tolouidina, benzo(a)pireno, PAS, displasia, carcinogénesis.
Introducción
Actualmente se han profundizado las investigaciones respaldadas por los avances en biología molecular, utilizando gran variedad de técnicas para la observación y el estudio del comportamiento de la génesis del cáncer. Una de las técnicas es la comprensión de la transformación celular en un modelo de carcinogénesis. Resultados de estos modelos de carcinogénesis química son consistentes con modificaciones epiteliales propuestas por Smith y Pindborg como: cambio en la queratinización, alteración de la capa granulosa, ulceración superficial, acantosis, atrofia, presencia de displasia y reacción inflamatoria(1).
Los cambios epiteliales en el cáncer oral han sido también asociados a la presencia de mastocitos y glucógeno intraepitelial. Se ha sugerido que el mastocito juega un papel importante en la fase de promoción de la carcinogénesis o podría actuar como célula blanco en la transformación neoplásica del epitelio. Sin embargo, el papel del mastocito en la carcinogénesis no es claro aún (2).
El glucógeno tanto a nivel intracelular como extracelular, también se ha asociado con los cambios epiteliales de la carcinogénesis oral. Se sugiere que las lesiones paraqueratósicas con escasez o ausencia de contenido de glucógeno, son de mal pronóstico (3).
En otro estudio (4) se concluyó que el contenido de glucógeno está asociado con el almacenamiento de energía, inflamación y su abundancia en lesiones precancerosas como la hiperplasia papilar. Aún, con todos estos hallazgos, la relación del glucógeno con los cambios epiteliales ocurridos en el proceso de carcinogénesis no es claro.Objetivos
- Determinar las modificaciones epiteliales de la mucosa labial en un modelo experimental de carcinogénesis química, siguiendo las definiciones operacionales de Smith y Pindborg (1).
- Evaluar la presencia de mastocitos y de glucógeno intraepitelial de la mucosa labial en un modelo experimental de carcinogénesis química.
Materiales y Métodos
Se utilizaron 57 muestras de mucosa labial de ratones machos IBF1 obtenidas de un estudio experimental previo, que fue realizado en el Instituto Nacional de Oncología y Radiología de Cuba.
En dicho estudio, se realizaron aplicaciones tópicas sobre la mucosa labial con Benzo(a)pireno al 0.01% diluido en acetona tres veces a la semana, durante 44 semanas y se compararon con un grupo control y un grupo al cual se había aplicado solamente la acetona, conformando así, tres grupos de tratamiento. Los ratones fueron sacrificados a las 8, 16, 32 y 44 semanas y se obtuvieron muestras de tejido de labio que se procesaron por la técnica clásica de inclusión en parafina y se cortaron en un micrótomo de Leitz de desplazamiento horizontal a un espesor de 5 micras cada corte.
En el presente estudio, las muestras se colorearon con H&E, azul de tolouidina y PAS con y sin diastasa. Luego se observaron al microscopio de luz y se evaluaron las modificaciones epiteliales, siguiendo los parámetros para atipias epiteliales recomendados por Smith y Pindborg (1) y su relación con la presencia de glucógeno intraepitelial y mastocitos en el tejido conjuntivo subyacente. Para la evaluación del glucógeno y los mastocitos, se tuvo en cuenta la intensidad de la reacción (PAS y azul de tolouidina), clasificándola en ligera, moderada o intensa de acuerdo con el contenido intracitoplasmático observado en células de 10 campos microscópicos seleccionados al azar. Todas las muestras fueron evaluadas por un solo observador entrenado en el área, para que el proceso fuera estandarizado. Toda la información fue registrada en las tablas y las figuras, confeccionadas para tal efecto.
Se consideraron las variables Tratamiento y Semanas como las variables independientes (o variables de clasificación) y las restantes como las variables dependientes, por lo que se realizó el análisis de esta dependencia. Para las variables Queratinización, Grosor Epitelial, Displasia, Inflamación, Mastocitos y Glucógeno se realizó un Análisis de Varianza con respecto a los valores de los diferentes niveles de cada una de las variables dependientes. En este Análisis de Varianza se consideraron dos factores de clasificación: Tratamientos y Semanas; de modo que se pudo decir si hay diferencias entre los Tratamientos para todas las Semanas y también, si hay diferencias entre las Semanas para todos los Tratamientos.
En el caso de las variables Estrato Granuloso y Ulceración, se realizó un análisis diferente debido a que las observaciones son de carácter dicotómico, es decir Sí o No. En este caso se realizó una prueba de igualdad de frecuencias entre las Semanas para cada uno de los Tratamientos.
También se empleó la tabla de frecuencias de SI o NO para efectuar una prueba de independencia (Tabla de Contingencia) entre Tratamientos y Semanas.
Resultados
En la semana 44 no se tomaron valores para las diferentes muestras, debido a que en esta semana el cáncer ya había infiltrado la membrana basal, lo que impidió valorar el consumo de glucógeno intraepitelial. La única variable evaluada en la semana 44 fue mastocitos, debido a que su valoración era a nivel del tejido conectivo subyacente, lo que facilitaba estudiar su presencia durante la carcinogénesis hasta el cáncer establecido.
Queratinización
Los datos para todas las semanas en los tratamientos Acetona y Control, fueron para todos ortoqueratosis. Ninguna muestra presentó para ni hiperparaqueratosis.
Los valores obtenidos se presentan en la Tabla 1.
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Tabla 1. |
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QUERATINIZACIÓN |
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| TTOS | Acetona | Benzopireno | Control | |||||||||
| SEM | 1 | 2 | 3 | 4 | 1 | 2 | 3 | 4 | 1 | 2 | 3 | 4 |
| 8 | 5 | 0 | 0 | 0 | 6 | 0 | 3 | 0 | 4 | 0 | 0 | 0 |
| 16 | 4 | 0 | 0 | 0 | 2 | 0 | 7 | 0 | 5 | 0 | 0 | 0 |
| 32 | 4 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 4 | 0 | 4 | 0 | 0 | 0 |
| 44 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
Se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre tratamientos así: Benzopireno-Acetona y Benzopireno-Control. P < 0.05.
Estrato granuloso
El estrato granuloso se encontró presente en absolutamente todas las muestras de todos los tratamientos en todas las semanas.
Grosor epitelial
Los valores del tratamiento con Acetona no cambiaron en todas las semanas, manteniéndose normal en todas las muestras.
Los datos para el grosor epitelial de las muestras se resumen en la Tabla 2.
| Tabla 2. Evaluación del grosor epitelial de acuerdo a los diferentes tratamientos según las semanas |
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| GROSOR EPITELIAL | |||||||||||||||
| TTO | Acetona | Benzopireno | Control | ||||||||||||
| SEM | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 8 | 5 | 0 | 0 | 0 | 0 | 4 | 4 | 0 | 0 | 1 | 3 | 1 | 0 | 0 | 0 |
| 16 | 4 | 0 | 0 | 0 | 0 | 3 | 5 | 1 | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 0 | 1 |
| 32 | 4 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | 1 | 2 | 0 | 4 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 44 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
Se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los tratamientos así: Benzopireno-Acetona p < 0.05.