REVISTA DE ODONTOLOGÍA
Materiales y métodos
Población y muestra
Se realizó un estudio descriptivo en una población que estuvo conformada rpo pacientes diagnosticados con periodontitis agresiva, con diagnóstico de gingivitis inducida por placa bacteriana o periodontalmente sanos. Los pacientes periodontalmente sanos y con gingivitis inducida por placa se tomaron como un solo grupo, ya que estudios previos han comprobado que la encía clínicamente sana muestra evidencia histológica de inflamación similar a la observada en gingivitis.
De esta población se tomó una muestra no probabilística por conveniencia que estuvo conformada por 10 biopsias de tejido gingival periodontalmente sano o con diagnóstico de gingivitis inducida por placa bacteriana y nueve biopsias de tejido gingival con diagnóstico de periodontitis agresiva.
Se incluyeron las biopsias de pacientes con diagnóstico clínico de periodontitis agresiva, gingivitis inducida por placa bacteriana y pacientes periodontalmente sanos que requerían cirugía periodontal; las edades estaban comprendidas entre los 18 y 41 años. Los pacientes incluidos en este estudio estaban sistémicamente sanos, no debían haber ingerido antibióticos ni corticoesteroides en los últimos seis meses y no eran fumadores. Se excluyeron las biopsias en las cuales no se pudo evidenciar claramente al microscopio el tejido conectivo gingival y los diferentes epitelios de la encía.
Biopsias
Las biopsias se tomaron, previo diligenciamiento del consentimiento informado por parte de los pacientes. Bajo anestesia local (xilocaína 2% con epinefrina 1:80000), se utilizó el siguiente procedimiento: se sondeó la zona seleccionada para la toma de la muestra con una sonda periodontal (Hu-Friedy
Ò), en tres puntos del diente (mesial, medial, distal), se realizó incisión a bisel interno y luego incisión intrasurcular, obteniendo un bisel de tejido el cual fue inmediatamente colocado en formalina al 10%. Los tejidos fueron embebidos en parafinaorientándolos de manera que en los cortes se pudieran ver los epitelios oral, surcular, de la bolsa, de unión y el tejido conectivo gingival. Se obtuvieron cortes de 6 mm de grosor que se colocaron en placas de vidrio previamente tratadas con organosilano. A la muestra de cada individuo se le realizó una descripción histológica del infiltrado celular con una tinción de hematoxilina-eosina con el objetivo de observar la adecuada orientación del tejido.
Técnica de inmunohistoquímica
Las placas fueron desparafinizadas por incubación a 37
oC e hidratadas por tratamiento con xilol y alcoholes a diferentes concentraciones. Los lavados se hicieron con buffer TBS pH 8.0 con tween al 0.05% (TTBS). Posterior a un acondicionamiento de los tejidos con buffer citrato se aplicó peróxido de hidrógeno al 3% para bloquear peroxidadas endógenas. La detección de las células para CD3+, CD4+ y CD8+ fue realizada con el kit NLC-RTU-Qu de Novocastra.Brevemente, posterior al bloqueo con suero normal de caballo (normal horse serum), se incubaron las muestras con anticuerpos monoclonales anti-CD3 (RTU-CD3-PS1), anti.CD4 (RTU-CD4-1F6) y anti-CD8 (RTU-CD8-295) de marca Novocastra Laboratories, durante toda la noche a temperatura ambiente. Como anticuerpo secundario se utilizó un anti-IgG de ratón conjugado con biotina. Tras la adición del complejo streptavidina-peroxidasa, la reacción se reveló con el sustrato DAB. El contraste se hizo con hematoxilina y las placas se cubrieron con citorresina. Como control negativo se realizó el procedimiento de manera similar, sin agregar el anticuerpo primario a las biopsias. Como control positivo se utilizó una biopsia de amígdala humana que se colocó en cada placa.
Conteo celular
Los recuentos celulares de los sitios seleccionados se hicieron con un microscopio óptico de luz (Olympus Optical) con objetivo de 40X, ocular de 10X realizando un barrido por toda la biopsia y contando las células marcadas con cada uno de los anticuerpos tratando de localizar siempre el mismo campo en cada placa. Adicionalmente se contó el número total de células mononucleares por campo de 40x. En los campos donde había abundante infiltrado celular se hizo el conteo con la ayuda de una cuadrícula para poder hacer un conteo más exacto. Para cada muestra se procesó una placa por anticuerpo. En la Figura 1 se pueden observar las diferentes zonas tenidas en cuenta para el análisis de las placas.

Figura 1. Zonas para el conteo celular.
Para el análisis estadístico se utilizó la prueba estadística no paramétrica U de Mann Whitney con el objetivo de comparar dos grupos no pareados.
Resultados
Hallazgos histopatológicos
El análisis bajo microscopía de luz de las secciones de tejido teñidas con hematoxilina y eosina de 19 biopsias de pacientes con periodontitis agresiva (PA) y con gingivitis inducida por placa bacteriana (G) mostró los siguientes resultados: en las biopsias de periodontitis agresiva el infiltrado inflamatorio se ubicó principalmente en el tejido conectivo profundo, subyacente al epitelio de la bolsa y fue de tipo linfo-plasmocitario (Figura 2). En las muestras de gingivitis el infiltrado inflamatorio fue, en términos generales, escaso (a excepción de dos casos en los cuales fue moderado), compuesto por linfocitos, muy pocos neutrófilos y se ubicó en la lámina propia subyacente al epitelio surcular y de unión (Figura 3).

Figura 2. Tincón con hematoxilina-eosina (periodontitis agresiva) 4x.

Figura 3. Tincón con hematoxilina-eosina (gingivitis inducida por placa
basteriana) 4x.
Hallazgos inmunohistoquímicos
La mayoría de células con morfología mononuclear fueron células CD3
+, en biopsias de gingivitis (G). Las células CD3+ se ubicaron subyacentes al epitelio de la bolsa en periodontitis agresiva (PA) y al epitelio surcular y de unión en gingivitis (Figuras 4, 7, 8 y 9). Se observó, en términos generales, un mayor número de células CD8+ que CD4+ tanto en biopsias de periodontitis agresiva como de gingivitis (Figuras 4, 5 y 6).
![]() Figura 4. Células CD8+ en lámina propia. Periodontitis agresiva. |
![]() Figura 7. Células CD3+ en lámina propia. Periodontitis agresiva. 40x. |
![]() Figura 5. Células CD8+ en concectivo profundo. Periodontitis agresiva. 40x. |
![]() Figura 8. Células CD3+ en lámina propia. Gingivitis inducida por placa bacteriana. 10x. |
![]() Figura 6. Células CD4+ en lámina propia. periodontitis agresiva. 40x. |
![]() Figura 9. Células CD8+ en lámina propia. Periodontitis agresiva. 40x. |
El porcentaje de células T (CD3+) CD4+ y CD8+, su proporción y su ubicación (lámina propia o conectivo profundo) en biopsias de periodontitis agresiva y de gingivitis se muestran en la Tabla 1.
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Tabla 1. |
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PERIODONTITIS AGRESIVA n=9 |
GINGIVITIS n=10 | |||||||
| %CD3 | %CD4 | %CD8 | CD4/CD8 | %CD3 | %CD4 | %CD8 | CD4/CD8 | |
| Lámina propia | ||||||||
| PROMEDIO | 32,95 | 8,52 | 21,68 | 0,38 | 61,12 | 29,15 | 31,76 | 0,92 |
| MEDIANA | 32,02 | 7,69 | 17,13 | 0,46 | 51,81 | 25,32 | 32,50 | 0,94 |
| DS | 16,01 | 6,85 | 10,16 | 0,22 | 15,14 | 13,96 | 5,02 | 0,40 |
| Conectivo profundo | ||||||||
| PROMEDIO | 30,78 | 7,86 | 21,57 | 0,40 | 64,29 | 29,66 | 30,40 | 1,17 |
| MEDIANA | 33,29 | 8,32 | 23,77 | 0,33 | 66,67 | 30,68 | 30,00 | 1,00 |
| DS | 21,43 | 7,14 | 15,21 | 0,25 | 11,04 | 6,48 | 11,44 | 0,77 |
Se encontró una disminución estadísticamente significativa en células CD3+ a expensas de una disminución en células CD4+ para el grupo de Periodontitis Agresiva al compararlo con el de Gingivitis (p < 0.01).
Con respecto al porcentaje de células CD4+ en lámina propia (p < 0.01) y en conectivo profundo (p < 0.001) se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los dos grupos (PA y G), siendo éste menor en el grupo de periodontitis agresiva. Por el contrario, para las células T CD8+ no se encontraron diferencias estadísticamente significativas al comparar los dos grupos (PA y G) tanto en lámina propia como en conectivo profundo.
Al analizar el índice CD4+/CD8+ hubo diferencias estadísticamente significativas entre los dos grupos (PA y G) tanto en lámina propia como en conectivo profundo, siendo éste mayor para el grupo de gingivitis en ambos casos (p < 0.01). (Figuras 10 y 11).
![]() Figura 10. Linfocitos en lámina propia con respecto al total de células con morfología mononuclear. |
![]() Figura 11. Linfocitos en conectivo profundo con respecto al total de células con morfología mononuclear. |
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