GUÍA DE ATENCIÓN DE LA MALARIA

 

Anexo 2

 Técnicas y procedimientos de laboratorio en malaria

 

2.1 Toma de muestras

 

• Llenar ficha epidemiológica

 

• Tomar muestra en un area fisica ordenada

 

• Marcar la lamina en el borde esmerilado o rotular con cinta de enmascarar

 

• Con manos enguantadas realizar la limpieza del dedo del corazon o indice del paciente, con algodon mojado en alcohol (en el caso de niños se puede tomar el dedo gordo del pie, el talon o el lobulo de la oreja) dejar secar y puncionar con lanceta esteril desechable el borde lateral del dedo a la altura del nacimiento de la una   • Limpiar la primera gota de sangre con algodon seco; presionar el dedo y colocar la siguiente gota a un centimetro de la marca de la lámina portaobjetos; poner en contacto la lamina con la gota de sangre, de manera delicada, evitando que la lamina toque el dedo del paciente. Realizar dos láminas de gota gruesa por paciente   • Extender la gota de sangre para formar un cuadrado de aproximadamente 1 cm x 1 cm y un grosor y homogeneidad adecuados y asi obtener un mayor número de campos microscopicos ideales. Para realizar un extendido, presionar el dedo para obtener una nueva gota de sangre del paciente   • Dejar secar la gota de sangre a la temperatura ambiente en una superficie plana y libre de polvo. Limpiar con alcohol la lamina utilizada para realizar las gotas gruesas para evitar contaminar las siguientes muestras.

 

• Colorear con alguna de las coloraciones derivadas de Romanowsky

 

• Observar al microscopio con objetivo de 10x y 40x para la seleccion de los campos donde se encuentre mayor número de globulos blancos. Posteriormente, mirar con objetivo de 100x y buscar las formas parasitarias propias del plasmodium. De no visualizar el parasito, se deben observar por lo menos 200 campos microscopicos antes de calificar la muestra como negativa

 

• Debe tenerse presente que un buen campo microscopico es aquel en el cual se observan de diez a veinte leucocitos por campo.

 

2.2 Coloración de Romanowsky

 

Los colorantes derivados del metodo original de Romanowsky sirven para la diferenciacion de la mayoria de estructuras normales y anormales de la sangre.

 

Los componentes basicos del colorante tipo Romanowsky son las tiacinas y los componentes acidos son las eosinas, razon por la cual se denominan eosinatos de tiacina. Las tiacinas estan constituidas por azul de metileno y por diversas proporciones de sus analogos producidos por desmetilacion oxidativa: azur B, azur A y azur C. La mayoria de ellos se disuelve en alcohol metilico.

 

Entre los colorantes de Romanowsky se encuentran: la coloracion de Field, Giemsa, Wright y Romanowsky modificada.

 

La coloracion de Romanowsky modificada es indicada para trabajar en climas calidos ya que no es higroscopica, es decir, que no absorbe la humedad del ambiente como lo son Giemsa y Wright, razon que la hace más estable en climas con alta humedad relativa. Los componentes de la coloración de Romanowsky modificada la hacen la más economica.

 

 

2.3 Formulación y preparación de las soluciones

 

2.3.1 Solución amortiguadora

 

Ortofosfato disodico anhidro Na2HPO4                                          10 g

Ortofosfato monopotasico KH2PO4                                                 5 g

 

Las sales se maceran y mezclan muy bien en un mortero, se disuelve un gramo de la mezcla en un litro de agua destilada. Las proporciones de sales anteriores dan buenos resultados tanto para preservacion celular como para obtener los colores ideales en la coloracion. La prueba de idoneidad del agua amortiguadora esta dada por el aspecto de las celulas sanguineas, es decir, cuando se observan al microscopio despues de la coloracion (globulos blancos y principalmente las plaquetas). El pH final obtenido es aproximado a los 7.2.

 

2.3.2 Azul de metileno fosfatado

 

Cloruro de azul de metileno para microscopia                                      1 g

Ortofosfato disodico anhidro Na2HPO4                                                  g

Ortofosfato monopotasico KH2PO4                                                    1 g

 

Triturar muy bien los reactivos para lograr una mezcla homogenea. Pesar 0.8 g para disolver en 200 ml de agua destilada de buena calidad. De este stock se toma la alicuota de uso para una semana que corresponde a 50 ml, previamente filtrada, y se sirve en un frasco limpio, oscuro, boca ancha y tapa rosca. La solucion stock se puede conservar a 4°C; se debe tener en cuenta que antes de precolorear, el reactivo debe alcanzar la temperatura ambiente.